Uppgiften renhet 99 procent på ett analyscertifikat beskriver proportionerna i ett kromatogram, inte hur mycket peptid som finns i pulvret. Det är två olika siffror, och de mäts med två olika metoder. Här går vi igenom vad varje rad i ett sådant dokument betyder, vad du inte kan läsa ut ur det och hur du kontrollerar ursprunget på en flaska från vår butik.
Hur ska ett analyscertifikat se ut?
Utgångspunkten är ett konsensusdokument som publicerades i Clinical Chemistry 2016. Det är undertecknat av flera tiotal författare från kliniska laboratorier, från peptidtillverkare till metrologiska institut. Dokumentet beskriver hur peptider ska karakteriseras, förvaras och beskrivas för att resultat från olika laboratorier ska gå att jämföra.
Det skrevs för proteinforskning och inte för butiker. Just därför är det en bra måttstock: ingen skrev det för att sälja något.
Vad mäter den kromatografiska renheten?
Konsensusdokumentet pekar ut högupplösande vätskekromatografi med omvänd fas, på en C18-kolonn, med detektion i ultraviolett ljus. Provet delas upp i sina beståndsdelar och detektorn ritar toppar. Renheten i procent är huvudtoppens andel av ytan under alla toppar.
Av den definitionen följer en begränsning som säljare sällan nämner. Metoden jämför beståndsdelarna med varandra och ser därför inte det som detektorn inte ser. Salt, vatten och motjoner ger ingen topp i ultraviolett ljus och finns inte med i den siffran.
Hur bekräftar masspektrometri att det är rätt molekyl?
Den andra metoden är masspektrometri med elektrosprayjonisering eller MALDI-teknik. Konsensusdokumentet kallar den nödvändig för att bekräfta att flaskan innehåller den sökta produkten och för att upptäcka föroreningar med annan massa. Tekniken LC-MS/MS går längre och bekräftar aminosyrasekvensen och var eventuella modifieringar sitter.
Rollfördelningen mellan metoderna är enkel. Kromatografin säger hur rent provet är, och masspektrometrin säger om det är rätt ämne. Ett certifikat som saknar den senare lämnar frågan om innehållets identitet öppen.
Vad är peptidhalt, och varför saknas den ofta?
Den tredje uppgiften kallas peptidhalt och anger hur mycket faktisk peptid som ryms i det invägda provet. Den räknar bort massan av vatten och motjoner, som finns i varje peptid. Den bestäms med aminosyraanalys, alltså en annan metod än renheten.
Den praktiska följden gäller varje flaska med frystorkat pulver. Uppgiften 10 mg anger den invägda massan pulver, där också vatten och motjoner ingår. När du räknar ut koncentrationen efter upplösning arbetar du alltså med massan på etiketten och inte med massan ren peptid. Själva uträkningen beskriver guiden om att blanda peptider med bakteriostatiskt vatten.
Vad skiljer råpeptid från renad peptid?
Konsensusdokumentet delar in produkterna i två grupper. Renade peptider genomgår efter syntesen en kromatografisk separation som tar bort det mesta av salter och reagens från syntesen. Råpeptider behöver inte ha genomgått det steget, och då går varken exakt mängd eller renhet att ange.
Här ligger kärnan i skillnaden mellan en flaska med dokumentation och en utan. Ett saknat certifikat bevisar inte att produkten är dålig, men det lämnar köparen utan en enda siffra att kontrollera. Hur du känner igen en äkta peptid förklarar guiden om att känna igen äkta peptider.
Vad säger dokumentet om förvaring?
Konsensusdokumentet anger också under vilka förhållanden peptiden behåller sina egenskaper. För långtidsförvaring frystorkas peptider och hålls vid minus 20 till minus 80 grader Celsius. Upprepad frysning och upptining ska undvikas, och arbetslösningar behandlas som ett kortsiktigt förråd, i upp till tre månader.
Förhållandena beskriver ett laboratorium, inte ett kylskåp hemma. Vad av detta som gäller en flaska köpt för egen forskning förklarar guiden om att förvara pulver och lösning.
Hur kontrollerar du en flaska köpt hos oss?
Bio-Peptide och Genheal har en unik kod under ett hologram. Du skrapar bort hologrammet, går till tillverkarens webbplats, väljer fliken för äkthetskontroll och skriver in koden. Nouveaux Ltd. har en egen verifieringssida. Vägen steg för steg visar sidan kontrollera din produkt, och skillnaderna mellan märkena samlas i guiden om Bio-Peptide, Genheal och Nouveaux Ltd.
Kodkontrollen bekräftar förpackningens ursprung, inte innehållets sammansättning. Det är två olika frågor, och det lönar sig att hålla isär dem. Hela sortimentet med priser finns i prislistan.
Vanliga frågor
Vad betyder renhet 99 procent på certifikatet?
Huvudtoppens andel av ytan under alla toppar i kromatogrammet. Salt och vatten ingår inte i den siffran.
Vad skiljer renhet från peptidhalt?
Renheten jämför provets beståndsdelar med varandra. Peptidhalten anger hur mycket peptid som finns i den invägda massan pulver.
Varför finns masspektrometri med i certifikatet?
Den bekräftar molekylens identitet och upptäcker föroreningar med annan massa. Kromatografin ensam avgör inte det.
Är 10 mg på etiketten 10 mg ren peptid?
Nej. Det är den invägda massan pulver, där också vatten och motjoner ingår.
Hur kontrollerar jag att flaskan är äkta?
Med koden under hologrammet på tillverkarens webbplats. Bio-Peptide och Genheal använder kod, Nouveaux Ltd. har en egen verifieringssida.
Varifrån uppgifterna kommer
Metoderna, indelningen i råa och renade peptider och förvaringsvillkoren kommer från konsensusdokumentet om karakterisering av peptider i Clinical Chemistry, 2016. Beskrivningen av kodkontrollen gäller tillverkarnas egna verifieringssidor.
Källor
- Hoofnagle AN, Whiteaker JR, Carr SA et al. Recommendations for the Generation, Quantification, Storage, and Handling of Peptides Used for Mass Spectrometry-Based Assays. Clinical Chemistry, 2016, 62(1): 48-69. https://doi.org/10.1373/clinchem.2015.250563