La dicitura purezza 99 per cento su un certificato di analisi descrive proporzioni in un cromatogramma, e non la quantità di peptide contenuta nella polvere. Sono due numeri diversi, misurati con due metodi diversi. Ecco che cosa significa ogni riga di un documento del genere, che cosa non permette di leggere e come verificare l'origine di un flaconcino comprato nel nostro negozio.
Come deve essere un certificato di analisi?
Il punto di riferimento è un consenso pubblicato su Clinical Chemistry nel 2016. È stato firmato da diverse decine di autori provenienti da laboratori clinici, dai produttori di peptidi agli istituti di metrologia. Il documento descrive come caratterizzare, conservare e descrivere i peptidi perché i risultati di laboratori diversi siano confrontabili.
È stato scritto per la ricerca sulle proteine, e non per i negozi. È proprio questo che ne fa un buon riferimento: nessuno lo ha scritto per vendere.
Che cosa misura la purezza cromatografica?
Il consenso indica la cromatografia liquida ad alta prestazione in fase inversa, su colonna C18, con rilevazione nell'ultravioletto. Il campione viene separato nei suoi componenti e il rivelatore traccia dei picchi. La purezza in percentuale è la quota del picco principale sull'area di tutti i picchi.
Questa definizione comporta un limite di cui i venditori parlano raramente. Il metodo confronta i componenti tra loro e quindi non vede ciò che il rivelatore non vede. Sale, acqua e controioni non danno un picco nell'ultravioletto e non compaiono in questo numero.
Come conferma la spettrometria di massa la molecola giusta?
Il secondo metodo è la spettrometria di massa a ionizzazione electrospray o con la tecnica MALDI. Il consenso la ritiene indispensabile per confermare che il flaconcino contiene il prodotto cercato e per rilevare impurità di massa diversa. La tecnica LC-MS/MS va oltre e conferma la sequenza di aminoacidi e la posizione delle modifiche.
La divisione dei ruoli tra i due metodi è semplice. La cromatografia dice quanto è puro il campione, e la spettrometria di massa dice se si tratta della sostanza giusta. Un certificato che non ha la seconda lascia aperta la questione dell'identità del contenuto.
Che cos'è il contenuto di peptide, e perché spesso manca?
Il terzo dato si chiama contenuto di peptide e indica quanta parte di peptide reale si trova nel campione pesato. Esclude la massa dell'acqua e dei controioni, presenti in ogni peptide. Si determina con l'analisi degli aminoacidi, cioè con un metodo diverso da quello della purezza.
La conseguenza pratica riguarda ogni flaconcino di polvere liofilizzata. La dicitura 10 mg descrive la massa di polvere pesata, che contiene anche acqua e controioni. Per calcolare la concentrazione dopo lo scioglimento lavori quindi con la massa dell'etichetta, e non con la massa di peptide puro. Il calcolo in sé è descritto nella guida per ricostituire un peptide con acqua batteriostatica.
Che cosa distingue un peptide grezzo da un peptide purificato?
Il consenso divide i prodotti in due gruppi. I peptidi purificati passano, dopo la sintesi, per una separazione cromatografica che elimina la maggior parte dei sali e dei reagenti di sintesi. I peptidi grezzi non hanno necessariamente questo passaggio, e in quel caso non è possibile indicare né la quantità esatta né la purezza.
È il cuore della differenza tra un flaconcino documentato e un flaconcino senza documentazione. L'assenza di certificato non prova che il prodotto sia cattivo, ma lascia chi compra senza alcun numero da verificare. Come accertarsi dell'autenticità è spiegato nella guida per riconoscere un peptide autentico.
Che cosa dice lo stesso documento sulla conservazione?
Il consenso indica anche in quali condizioni un peptide mantiene le sue proprietà. Per una conservazione lunga i peptidi sono liofilizzati e tenuti tra meno 20 e meno 80 gradi Celsius. Bisogna evitare congelamenti e scongelamenti ripetuti, e le soluzioni di lavoro sono trattate come una scorta a breve termine, fino a tre mesi.
Queste condizioni descrivono un laboratorio, non un frigorifero di casa. Che cosa se ne applica a un flaconcino comprato per le proprie ricerche è spiegato nella guida per conservare polvere e soluzione.
Come si verifica un flaconcino comprato da noi?
Bio-Peptide e Genheal mettono un codice unico sotto un ologramma. Gratti l'ologramma, vai sul sito del produttore, scegli la sezione sull'autenticità e inserisci il codice. Nouveaux Ltd. ha una propria pagina di verifica. Il percorso passo per passo è sulla pagina verifica il tuo prodotto, e le differenze tra le marche sono riunite nella guida su Bio-Peptide, Genheal e Nouveaux Ltd.
La verifica del codice conferma l'origine della confezione, e non la composizione del contenuto. Sono due domande diverse, che conviene tenere separate. L'offerta completa con i prezzi è nel listino prezzi.
Domande frequenti
Che cosa significa una purezza del 99 per cento sul certificato?
La quota del picco principale sull'area di tutti i picchi del cromatogramma. Sale e acqua non sono compresi in questo numero.
Che cosa distingue la purezza dal contenuto di peptide?
La purezza confronta i componenti del campione tra loro. Il contenuto di peptide indica quanto peptide si trova nella massa di polvere pesata.
A che cosa serve la spettrometria di massa nel certificato?
Conferma l'identità della molecola e rileva le impurità di massa diversa. La sola cromatografia non lo permette.
I 10 mg dell'etichetta sono 10 mg di peptide puro?
No. È la massa di polvere pesata, che contiene anche acqua e controioni.
Come si verifica che un flaconcino sia autentico?
Con il codice sotto l'ologramma, sul sito del produttore. Bio-Peptide e Genheal usano un codice, Nouveaux Ltd. ha una propria pagina di verifica.
Da dove vengono queste informazioni
I metodi, la distinzione tra peptidi grezzi e purificati e le condizioni di conservazione vengono dal consenso sulla caratterizzazione dei peptidi pubblicato su Clinical Chemistry, 2016. La descrizione della verifica del codice riguarda le pagine di verifica dei produttori.
Fonti
- Hoofnagle AN, Whiteaker JR, Carr SA et al. Recommendations for the Generation, Quantification, Storage, and Handling of Peptides Used for Mass Spectrometry-Based Assays. Clinical Chemistry, 2016, 62(1): 48-69. https://doi.org/10.1373/clinchem.2015.250563