Die Angabe 99 Prozent Reinheit auf einem Analysenzertifikat beschreibt Verhältnisse im Chromatogramm, nicht die Menge an Peptid im Pulver. Das sind zwei verschiedene Zahlen, und sie werden mit zwei verschiedenen Methoden gemessen. Unten steht, was jede Angabe eines solchen Dokuments genau bedeutet, was man daraus nicht ablesen kann und wie unser Shop die Herkunft einer Ampulle prüft.
Woher wissen wir, wie ein solches Dokument aussehen sollte?
Der Bezugspunkt ist ein Konsens, der 2016 in Clinical Chemistry erschien. Unterzeichnet haben ihn mehrere Dutzend Autoren aus klinischen Laboren, von Peptidherstellern bis zu metrologischen Instituten. Das Dokument beschreibt, wie Peptide charakterisiert, gelagert und beschrieben werden sollen, damit Ergebnisse aus verschiedenen Laboren vergleichbar sind.
Es entstand für die Proteinforschung, nicht für Shops. Gerade deshalb ist es ein guter Bezugspunkt: niemand hat es für den Verkauf geschrieben.
Chromatographische Reinheit: was misst sie wirklich?
Der Konsens nennt die Hochleistungsflüssigkeitschromatographie in Umkehrphase, auf einer C18-Säule, mit UV-Detektion. Die Probe wird in ihre Bestandteile getrennt, und der Detektor zeichnet Peaks auf. Die Reinheit in Prozent ist der Anteil des Hauptpeaks an der Fläche aller Peaks.
Aus dieser Definition folgt eine Grenze, über die Verkäufer selten sprechen. Die Methode vergleicht die Bestandteile untereinander und sieht deshalb nicht, was der Detektor nicht sieht. Salz, Wasser und Gegenionen erzeugen im UV-Licht keinen Peak und kommen in dieser Zahl nicht vor.
Massenspektrometrie: ist es wirklich dieses Molekül?
Die zweite Methode ist die Massenspektrometrie mit Elektrospray-Ionisation oder MALDI. Der Konsens nennt sie unverzichtbar, um zu bestätigen, dass in der Ampulle das gesuchte Produkt ist, und um Verunreinigungen mit anderer Masse zu erkennen. Die Technik LC-MS/MS geht weiter und bestätigt die Aminosäuresequenz samt Ort einer Modifikation.
Die Arbeitsteilung zwischen beiden Methoden ist einfach. Die Chromatographie sagt, wie rein die Probe ist, die Massenspektrometrie sagt, ob es die richtige Substanz ist. Ein Zertifikat ohne die zweite Methode lässt die Frage nach der Identität des Inhalts offen.
Peptidgehalt: die Zahl, die meist fehlt
Die dritte Angabe heißt Peptidgehalt und beschreibt, wie viel tatsächliches Peptid in der eingewogenen Probe steckt. Sie schließt die Masse von Wasser und Gegenionen aus, die in jedem Peptid vorhanden sind. Bestimmt wird sie per Aminosäureanalyse, also mit einer anderen Methode als die Reinheit.
Die praktische Folge betrifft jede Ampulle mit Lyophilisat. Die Angabe 10 mg beschreibt die eingewogene Pulvermasse, in der auch Wasser und Gegenionen stecken. Beim Berechnen der Konzentration nach dem Auflösen arbeitet man also mit der Masse vom Etikett, nicht mit der Masse des reinen Peptids. Die Berechnung selbst beschreibt der Leitfaden zum Auflösen mit bakteriostatischem Wasser.
Rohpeptid und gereinigtes Peptid
Der Konsens teilt die Produkte in zwei Gruppen. Gereinigte Peptide durchlaufen nach der Synthese eine chromatographische Trennung, die den Großteil der Salze und Syntheserückstände entfernt. Rohpeptide müssen diesen Schritt nicht haben, und dann lassen sich weder genaue Menge noch Reinheit angeben.
Das ist der Kern des Unterschieds zwischen einer Ampulle mit Dokumentation und einer ohne. Ein fehlendes Zertifikat beweist nicht, dass ein Produkt schlecht ist, aber es lässt den Käufer ohne eine einzige Zahl, die er prüfen könnte. Wie man ein Originalprodukt erkennt, erklärt der Leitfaden Echte Peptide erkennen.
Die Lagerung im selben Dokument
Der Konsens nennt auch die Bedingungen, unter denen ein Peptid seine Eigenschaften behält. Für die Langzeitlagerung werden Peptide lyophilisiert und bei minus 20 bis minus 80 Grad Celsius aufbewahrt. Wiederholtes Einfrieren und Auftauen ist zu vermeiden, und Arbeitslösungen gelten als kurzfristiger Vorrat, bis zu drei Monate.
Diese Bedingungen beschreiben ein Labor, keinen Haushaltskühlschrank. Was davon auf eine für eigene Forschung gekaufte Ampulle übertragbar ist, erklärt der Leitfaden zum Lagern von Pulver und Lösung.
Wie prüfen Sie eine bei uns gekaufte Ampulle?
Bio-Peptide und Genheal bringen unter dem Hologramm einen eindeutigen Code an. Sie rubbeln das Hologramm frei, öffnen die Website des Herstellers, wählen den Bereich zur Echtheitsprüfung und geben den Code ein. Nouveaux Ltd. betreibt eine eigene Prüfseite. Den Weg Schritt für Schritt zeigt die Seite Produkt prüfen, die Unterschiede zwischen den Marken selbst fasst der Leitfaden über Bio-Peptide, Genheal und Nouveaux Ltd. zusammen.
Die Codeprüfung bestätigt die Herkunft der Verpackung, nicht die Zusammensetzung des Inhalts. Das sind zwei verschiedene Fragen, und es lohnt sich, sie getrennt zu halten. Alle Produkte mit Preisen stehen in der Preisliste.
Häufige Fragen
Was bedeutet 99 Prozent Reinheit auf dem Analysenzertifikat eines Peptids?
Den Anteil des Hauptpeaks an der Fläche aller Peaks im Chromatogramm. Salz, Wasser und Gegenionen umfasst diese Zahl nicht, weil sie im UV-Licht keinen Peak erzeugen.
Worin unterscheidet sich die chromatographische Reinheit vom Peptidgehalt?
Die Reinheit vergleicht die Bestandteile der Probe untereinander, der Peptidgehalt sagt, wie viel Peptid in der eingewogenen Pulvermasse steckt. Gemessen werden sie mit zwei verschiedenen Methoden.
Wozu dient die Massenspektrometrie im Analysenzertifikat?
Sie bestätigt, dass in der Ampulle das gesuchte Molekül ist, und erkennt Verunreinigungen mit anderer Masse. Die Technik LC-MS/MS bestätigt zusätzlich die Aminosäuresequenz.
Bedeuten 10 mg auf dem Etikett 10 mg reines Peptid?
Nein. Das ist die eingewogene Pulvermasse, in der auch Wasser und Gegenionen stecken, die beim Peptidgehalt herausgerechnet werden.
Wie prüft man, ob eine Peptidampulle original ist?
Mit dem Code unter dem Hologramm auf der Website des Herstellers. Bio-Peptide und Genheal verwenden einen Code unter dem Hologramm, Nouveaux Ltd. betreibt eine eigene Prüfseite.
Quellen
- Hoofnagle AN, Whiteaker JR, Carr SA et al. Recommendations for the Generation, Quantification, Storage, and Handling of Peptides Used for Mass Spectrometry-Based Assays. Clinical Chemistry, 2016, 62(1): 48-69. https://doi.org/10.1373/clinchem.2015.250563